过/降表达KIF20A的宫颈癌细胞迁移、侵袭、上皮—间质转化能力变化及其分子机制

摘要

目的观察过/降表达KIF20A的宫颈癌细胞迁移、侵袭、上皮—间质转化(EMT)能力的变化,并探讨其可能的分子机制。方法培养人宫颈永生化鳞状细胞系ECT及人宫颈癌细胞系C33A、MS751、Hela、SiHa、CasKi,以RT-qPCR法检测细胞中KIF20A mRNA表达水平。选取KIF20A表达量最高的CasKi细胞并分为对照组和敲降组,分别转染sh-NC、sh-KIF20A;选取KIF20A表达量最低的Hela细胞分为对照组和过表达组,分别转染Vector、KIF20AOE。应用划痕实验和Transwell小室实验分别测定四组细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测四组细胞中EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin;利用细胞组分分离实验结合Western blotting法检测两组Hela细胞细胞质膜及细胞核中的β-catenin,免疫共沉淀实验结合Western blotting法检测两组Hela细胞中β-catenin免疫共沉淀的Ecadherin蛋白水平。结果划痕12、24、48 h时,CasKi细胞中敲降组划痕愈合率均低于对照组,Hela细胞中过表达组划痕愈合率均高于对照组(P均<0.05)。CasKi细胞中敲降组细胞迁移数少于对照组,Hela细胞中过表达组细胞迁移数多于对照组(P均<0.05)。CasKi细胞中,敲降组细胞中Vimentin蛋白表达量低于对照组,E-cadherin蛋白表达量高于对照组(P均<0.05);Hela细胞中,过表达组Vimentin蛋白表达量高于对照组,E-cadherin蛋白表达量低于(P均<0.05)。过表达组细胞膜中β-catenin蛋白表达量高于对照组,细胞核中β-catenin蛋白表达量低于对照组(P均<0.05)。与对照组比较,过表达组β-catenin免疫共沉淀的E-cadherin蛋白表达量减少(P<0.05)。结论过表达KIF20A能促进宫颈癌细胞迁移、侵袭,诱导EMT相关蛋白Vimentin表达并抑制E-cadherin表达;降表达KIF20A后,作用与之相反。该调控作用可能与KIF20A抑制E-cadherin/β-catenin复合物形成来诱导β-catenin激活有关。