外源性Klotho对糖尿病肾病小鼠成骨细胞甲状旁腺激素刺激的分化活性调控作用

摘要

目的 观察外源性Klotho对糖尿病肾病小鼠成骨细胞甲状旁腺激素(PTH)刺激的分化活性的调控作用.方法 18周龄KK-Ay糖尿病肾病模型小鼠及C57BL/6J对照小鼠各12只,处死后取股骨,采用骨片贴壁分离筛选法获取成骨细胞,分为A、B组,KK-Ay小鼠成骨细胞为A组,C57BL/6J小鼠成骨细胞为B组.A组成骨细胞分别加入不同浓度的PTH(1-34)、Klotho,分别记为A1、A2、A3、A4、A5组,其中A1组加入0μg/mL的PTH(1-34),A2组加入0.05μg/mL的PTH(1-34),A3组加入0.1μg/mL的PTH(1-34),A4组加入0.2μg/mL的PTH(1-34),A5组加入0.1μg/mL的PTH(1-34)和100 ng/mL的Klotho.B组成骨细胞参照A组各亚组给予相同处理,分别记为B1组、B2组、B3组、B4组、B5组.采用ELISA法检测各组细胞中环磷酸腺苷(cAMP),采用蛋白印迹法检测各组细胞中磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)1/2,作为成骨细胞对PTH刺激反应性的指标.结果 A1组、A2组、A3组、A4组细胞中cAMP浓度、p-PKA相对表达量、p-ERK1/2相对表达量组间相比,P均>0.05.B1组、B2组、B3组、B4组细胞中cAMP浓度、p-PKA相对表达量、p-ERK1/2相对表达量组间相比,P均0.05.结论 正常小鼠成骨细胞对PTH刺激反应性呈剂量依赖性上升,而糖尿病肾病小鼠成骨细胞对PTH刺激无反应;加入外源性Klotho可促进糖尿病肾病小鼠成骨细胞对PTH的刺激反应.