尾静脉注射miR-10a过表达慢病毒后动脉粥样硬化小鼠头臂干动脉内皮损伤情况、硬化斑块面积观察

摘要

目的 观察尾静脉注射miR-10a过表达慢病毒后动脉粥样硬化小鼠头臂干动脉内皮损伤情况、硬化斑块面积变化,并探讨其机制.方法 10只6周的雄性apoE-/-小鼠用含1.25％高胆固醇的饲料喂食4周,建立小鼠动脉粥样硬化模型并随机分为模型组和miR-10a组,每组5只.miR-10a组小鼠尾静脉注射100μL 1×108 PFU/mL的miR-10a慢病毒,模型组小鼠尾静脉注射等量生理盐水.两组小鼠继续饲养3周后处死,取头臂干动脉粥样硬化血管组织,甲苯氨蓝染色后透射电镜下观察小鼠内皮损伤情况,采用改良Masson三色染色法测算两组小鼠头臂干动脉中动脉粥样硬化斑块面积,采用Q-PCR法检测两组小鼠头臂干动脉动脉粥样硬化斑块内miR-10a,采用West-ern blotting法检测两组小鼠头臂干动脉动脉粥样硬化斑块内p-PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白.小鼠处死前眼球取血,采用Elisa法检测两组小鼠血清中抗磷脂抗体(anti-β2GP1)滴度.结果 模型组在电镜下可见内皮细胞受损、剥离、内膜增生、血管病变、表面粗糙;miR-10a组内皮细胞完整性较好,细胞长轴与血流方向平行,细胞排列相对整齐且内膜表面相对平滑.模型组小鼠头臂干动脉中动脉粥样硬化斑块面积为(11560.0±731.0)μm2,miR-10a组为(8779.0±461.4)μm2,两组相比,P<0.05.模型组小鼠头臂干动脉动脉粥样硬化斑块内miR-10a相对表达量为0.25±0.06,miR-10a组为0.37±0.05,两组相比,P<0.05.模型组小鼠头臂干动脉动脉粥样硬化斑块内p-PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白相对表达量分别为1.245±0.124、1.058±0.048、0.862±0.083,miR-10a组分别为0.833±0.046、0.533±0.047、0.293±0.050,两组相比,P均<0.05.模型组小鼠血清中anti-β2GP1滴度水平为(0.40±0.08)U/L,miR-10a组为(0.26±0.06)U/L,两组相比,P<0.05.结论 尾静脉注射miR-10a过表达慢病毒可改善动脉粥样硬化小鼠头臂干动脉内皮损伤情况、缩小硬化斑块面积,其机制与过表达miR-10a抑制抗磷脂抗体介导的PI3K/AKT/mTOR信号通路激活有关.