抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8表达对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌功能的影响观察

摘要

目的 观察抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)表达对MIN6胰岛β细胞胰岛素分泌功能及细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制.方法 将培养好的MIN6细胞分为3组,观察组转染siRNA-CDK8慢病毒液(可抑制细胞CDK8表达),空白组不给予任何干预,对照组转染siRNA-NC慢病毒液(阴性对照),培养48 h.CCK-8检测各组细胞增殖活性(OD值),流式细胞术观察各组细胞周期分布,ELISA法检测各组细胞上清液胰岛素,荧光定量PCR法检测各组细胞CDK8、胰岛素合成相关转录因子(PDX1、INS2和MAFA)、胰岛素转运相关因子GLUT2mRNA,Western blotting检测各组细胞CDK8、细胞周期蛋白(Cyclin)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)、增殖细胞核抗原(PCNA).结果 与对照组及空白组比较,观察组细胞OD值降低,G0/G1、S期细胞比例增加,细胞上清液胰岛素水平降低,CDK8、PDX1、INS、MAFA、GLUT2 mRNA相对表达量降低(P均＜0.05).与对照组及空白组比较,观察组CDK8、Cyclin D1、PCNA、PPARγ蛋白相对表达量降低(P均＜0.01).结论 抑制CDK8表达的MIN6细胞,细胞增殖活性显著下降,胰岛素分泌减少,其机制可能与抑制Cyclin D1、PCNA及PPARγ蛋白表达相关.