氧糖剥夺再灌注后星形胶质细胞活化、损伤、凋亡、自噬变化及意义

摘要

cqvip:目的观察氧糖剥夺再灌注(OGD/R)后星形胶质细胞活化、损伤、凋亡、自噬水平的变化,探讨自噬在星形胶质细胞缺血性损伤中的作用。方法分离C57BL/6小鼠的星形胶质细胞,分为对照组和氧糖剥夺再灌注(OGD/R)组,OGD/R组构建OGD/R模型并分别于缺氧缺糖培养后3、6、12 h更换正常培养基,对照组不做特殊处理;采用Western blotting法检测细胞中的星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Caspase-3、LC3B-Ⅱ,采用CCK-8实验检测并计算细胞存活率,采用二硝基苯肼法检测LDH漏出率,ELISA法检测细胞培养液中的TNF-α。分离C57BL/6小鼠的星形胶质细胞,分为对照组、3-MA对照组、OGD/R组、OGD/R+3-MA组;对照组不做特殊处理,OGD/R组、OGD/R+3-MA组建立OGD/R模型(缺氧缺糖培养后6 h更换正常培养基),3-MA对照组及OGD/R+3-MA组造模前加入1 mmol/L的3-MA;检测GFAP、细胞存活率、LDH漏出率、TNF-α水平、Caspase-3。结果OGD/R组不同处理时间细胞GFAP表达、LDH漏出率、TNF-α水平均高于对照组,细胞存活率低于对照组(P均<0.05);OGD/R组6 h、12 h时的Caspase-3/Pro-Caspase-3及LC3B-Ⅱ表达高于对照组(P均<0.05)。OGD/R+3-MA组细胞GFAP表达、LDH漏出率、TNF-α水平、Caspase-3/Pro-Caspase-3表达均低于OGD/R组,细胞存活率高于OGD/R组(P均<0.05)。结论OGD/R后星形胶质细胞活化和损伤增强,凋亡蛋白表达增加,自噬激活。自噬可能促进了星形胶质细胞的活化、损伤、凋亡,诱导星形胶质细胞缺血性损伤。