miR-20b在人骨肉瘤细胞中的表达及对Saos-2细胞增殖、侵袭能力的影响观察

摘要

cqvip:目的观察miR-20b在人骨肉瘤细胞系中的表达及对Saos-2细胞增殖、侵袭能力的影响,探讨其机制。方法采用qRT-PCR法检测人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、143B及人正常成骨细胞系hFOB1.19中miR-20b。将Saos-2细胞分成miR-20b沉默组和阴性对照组,利用Lipofectamine^(TM)2000分别转染miR-20b干扰序列miR-20b inhibitor和阴性对照序列scramble,采用qRT-PCR法检测转染后两组细胞中miR-20b,采用MTT法检测转染后两组细胞培养0、24、48、72、96、120 h时的光密度值(OD值,以OD值表示细胞增殖能力),采用Transwell实验观察转染后两组细胞穿膜细胞数(以穿膜细胞数表示细胞侵袭能力),采用Western blotting法检测转染后两组细胞PTEN蛋白。结果人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、143B及人正常成骨细胞系hFOB1.19中miR-20b的相对表达量分别为3.31±0.26、2.57±0.23、2.03±0.21和1.00±0.02,人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、143B中miR-20b的相对表达量与正常成骨细胞系hFOB1.19相比,P均<0.01。miR-20b沉默组Saos-2细胞中miR-20b相对表达量为0.12±0.01,阴性对照组为1.00±0.03,两组相比,P<0.01。miR-20b沉默组培养0、24、48、72、96、120 h时的OD值分别为0.29±0.02、0.39±0.03、0.62±0.06、0.89±0.07、1.34±0.11、2.02±0.17,阴性对照组培养0、24、48、72、96、120 h时的OD值分别为0.28±0.02、0.49±0.05、1.05±0.08、1.63±0.12、2.57±0.19、3.69±0.25,两组细胞培养48、72、96、120 h时的OD值相比,P均<0.05。miR-20b沉默组穿膜细胞数为(32.5±3.7)个,阴性对照组穿膜细胞数为(73.6±6.8)个,两组相比,P<0.01。miR-20b沉默组细胞PTEN蛋白相对表达量为2.37±0.15,阴性对照组细胞PTEN蛋白相对表达量为1.00±0.02,两组相比,P<0.01。结论miR-20b在人骨肉瘤细胞系中高表达;沉默miR-20b可抑制人骨肉瘤细胞系Saos-2的增殖和侵袭能力,其机制可能与上调PTEN蛋白表达有关。