黄芩素和汉黄芩素联合应用对恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒的抑制作用及最佳配比观察

摘要

cqvip:目的观察中药复方制剂肃毒星重要组分黄芩素和汉黄芩素联合应用对恩替卡韦(ETV)耐药乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用,探讨其最佳作用配比。方法取ETV耐药HBV稳定复制细胞系HepG2.A64,分为黄芩素组、汉黄芩素组、联用药物组和对照组。根据黄芩素和汉黄芩素的毒性实验结果,黄芩素组分别加入4、8、16μmol/L的黄芩素,记为B4、B8、B16组。汉黄芩素组分别加入3、6、12μmol/L的汉黄芩素,记为W3、W6、W12组。联用药物组的第一部分分别加入相同浓度(4μmol/L)的黄芩素及不同浓度(3、6、12μmol/L)的汉黄芩素,记为B4+W3、B4+W6、B4+W12组;联用药物组的第二部分分别加入相同浓度(8μmol/L)的黄芩素及不同浓度(3、6、12μmol/L)的汉黄芩素,记为B8+W3、B8+W6、B8+W12组;联用药物组的第三部分分别加入相同浓度(16μmol/L)的黄芩素及不同浓度(3、6、12μmol/L)的汉黄芩素,记为B16+W3、B16+W6、B16+W12组。对照组加入等量DMEM培养基。之后各组细胞培养96 h,采用PCR-荧光探针"一管法"检测细胞上清HBV DNA,计算HBV DNA抑制率;采用双抗体夹心法检测细胞上清HBsAg,计算HBsAg抑制率;荧光定量PCR法检测细胞内HBV总DNA、HBV共价闭合环状DNA(cccDNA),计算药物对HBV总DNA、HBV cccDNA抑制率;采用金正均Q值法计算药物相互作用的Q值。结果黄芩素组、汉黄芩素组、联用药物组细胞上清HBV DNA抑制率均高于对照组(P均<0.05),联用药物组细胞上清HBV DNA抑制率均高于相同药物浓度的黄芩素组、汉黄芩素组(P均<0.05),其中B16+W3组Q值最大(0.970)。黄芩素组、汉黄芩素组、联用药物组细胞上清HBsAg抑制率均高于对照组(P均<0.05),联用药物组中B8+W12、B16+W3、B16+W12组细胞上清HBsAg抑制率均高于相同药物浓度的黄芩素组、汉黄芩素组(P均<0.05),其中B16+W3组Q值最大(0.886)。黄芩素组、汉黄芩素组、联用药物组细胞内HBV总DNA抑制率均高于对照组(P均<0.05),联用药物组细胞内HBV总DNA抑制率均高于相同药物浓度的黄芩素组、汉黄芩素组(P均<0.05),其中B16+W3组Q值最大(1.183)。黄芩素组、汉黄芩素组、联用药物组细胞内HBV cccDNA抑制率均高于对照组(P均<0.05),联用药物组中B16+W3、B16+W6、B16+W12组细胞内HBV cccDNA抑制率均高于相同药物浓度的黄芩素组、汉黄芩素组(P均<0.05),其中B16+W3组Q值最大(0.972)。结论黄芩素、汉黄芩素单独及联合应用对ETV耐药HBV的DNA、HBsAg、cccDNA均有抑制作用,且黄芩素、汉黄芩素联合组较相同浓度的单药组抑制作用更强,16μmol/L黄芩素+3μmol/L汉黄芩素(配比约为5:1)的抑制作用最佳。