木犀草素与白藜芦醇联合应用对人肝癌细胞凋亡的影响及机制

摘要

cqvip:目的探讨木犀草素(Res)与白藜芦醇(Lut)联合应用对人肝癌细胞(HepG2)凋亡的影响及机制。方法常规培养HepG2、人正常肝细胞(LO2),将部分对数生长期的HepG2、LO2细胞分别用(终浓度为0、5、10、20μmol/L)Lut、(0、12.5、25、50μmol/L)Res及5μmol/L Lut+12.5μmol/L Res、5μmol/L Lut+25μmol/L Res、5μmol/L Lut+50μmol/L Res、10μmol/L Lut+12.5μmol/L Res、10μmol/L Lut+25μmol/L Res、10μmol/L Lut+50μmol/L Res、20μmol/L Lut+12.5μmol/L Res、20μmol/L Lut+25μmol/L Res、20μmol/L Lut+50μmol/L Res、10μmol/L索拉非尼的无血清DMEM培养基培养24 h。用MTT实验检测细胞活力;倒置显微镜下观察细胞的生长及形态变化,用DAPI染色法检测细胞凋亡;采用免疫荧光实验观察核因子κB(NF-κB)的入核情况;用Western blotting法检测细胞内NF-κB及凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)的表达;用qRT-PCR技术检测细胞内凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)mRNA表达。结果与未经药物处理的细胞相比,经10、20μmol/L Lut及25、50μmol/L Res单独处理后HepG2细胞相对存活率低(P均0.05);而索拉非尼处理24 h后LO2细胞相对存活率低(P<0.05)。经20μmol/L Lut、25μmol/L Res、20μmol/L Lut+25μmol/L Res处理后,HepG2细胞逐渐固缩,膜局部破损,死亡细胞多。DAPI染色发现,HepG2细胞核出现不同程度的核固缩和染色体片段化,经20μmol/L Lut+25μmol/L Res处理后的HepG2细胞变化更明显。同时,药物处理对LO2的细胞形态和DAPI染色后核形态均无明显影响。经Lut 20μmol/L+Res 25μmol/L处理后HepG2细胞内p-NF-κB蛋白相对表达量最低(P均<0.05),HepG2细胞内NF-κB入核被明显抑制。经Lut 20μmol/L+Res 25μmol/L处理后HepG2细胞内Bax、Caspase-3表达最高,Bcl-2表达最低(P均<0.05)。结论Lut与Res联合应用可促进HepG2细胞凋亡;其作用机制可能与抑制NF-κB激活,调控凋亡相关蛋白表达有关。