MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体.方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析.结果 PCR扩增出的反义片段与预期长度相符.构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3.1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamHⅠ和HindⅢ)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致.结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础.