重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究

摘要

目的获得高纯度的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性.方法表达rhOP-1工程菌经发酵后,裂菌、提取包涵体,层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性.采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对硝基苯酚法(PNPP)检测rhOP-1对细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,同时在体内通过小鼠肌袋埋植实验测定rhOP-1活性.结果经纯化的rhOP-1纯度可达98%.体外rhOP-1浓度在0.06～6μg/ml可明显促进细胞生长和ALP活性;体内rhOP-1埋植剂植入小鼠肌间隙2周后,可明显提高体内钙含量,且成骨趋势明显.结论原核表达的rhOP-1具有良好的生物学活性.