tPA基因逆转录病毒载体构建及纯包装细胞系培育

摘要

目的 构建含人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因逆转录病毒载体及产高滴度病毒的纯包装细胞系.方法 PCR技术扩增目的基因tPA,定向克隆人逆转录病毒载体pLEGFP-N1中,测序鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-tPA,将其转入包装细胞PT67,培育全EGFP纯包装细胞系;测定病毒滴度.结果 证实pLEGFP-N1-tPA中含有tPA基因.转染有PLEGFP-N1-tPA的纯PT67细胞产病毒滴度为1×107 CFU/ml.结论 成功构建了pLEGFP-N1-tPA载体,并培育了产高滴度病毒纯包装细胞系.