重组VEGF165基因表达与活性检测

摘要

目的 为血管内皮生长因子(VEGF165)生物学分子机制的研究奠定基础.方法 用RT-PCR法从人胎肝总RNA中逆转录扩增VEGF165,将其插入表达载体pET-32a(+) Vector中, 将测序鉴定正确的重组表达载体转化至E. Coli XL-Blue中表达,并用纯化蛋白刺激人脐静脉内皮细胞,检测其促增殖活性.结果 经异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)诱导后,VEGF165(His)6得到有效表达, Western blot分析可以观察到相对分子质量为26 kD的诱导表达条带,该表达蛋白可与VEGF多克隆抗体发生特异性反应.用His-bind亲和层析纯化得到纯度较高的目的 蛋白,该蛋白可促进内皮细胞增殖.结论 基因工程技术可使大肠杆菌有效表达人VEGF165,并得到纯度较高、有增殖活性的VEGF165蛋白;此为进一步研究VEGF的生物学分子机制奠定了基础.