时间分辨荧光免疫分析法检测C反应蛋白方法的建立及应用

摘要

目的 制备4,7-(氯磺酸基苯基)-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸(BCPDA)鳌合剂,并以其建立时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术检测C反应蛋白(CRP)的方法.方法 用二甲基甲酰胺(DMF)溶解自制BCPDA后测定其吸光度;以BCPDA分别标记铕(Eu3+)、CRP多克隆抗体制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3+荧光标记物;以纳米磁珠为固相载体包被CRP单克隆抗体,分别加入CRP抗原及CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3+,应用六合一板式检测仪检测CRP荧光强度.结果 自制BCPDA吸收光谱为220～360 nm, 用337 nm 的紫外光激发得到CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3+的荧光发射光谱, 利用TRFIA可检测到0.1 mg/L 的CRP抗原.结论 本研究成功制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3+荧光标记物并建立了TRFIA检测CRP的方法,此为临床检测CRP提供了新的思路,亦为TRFIA的推广应用提供了理论依据.