脐血间充质干细胞的体外扩增及向类肝细胞分化的实验研究

摘要

目的 探讨人脐带血间充质干细胞(UBC-MSCs)向类肝细胞定向分化的可能性.方法 无菌条件下采集新生儿脐带血75份,采用密度梯度离心法与直接贴壁法相结合分离UBC-MSCs,体外培养传代 ,获得第4代集落生长细胞作流式细胞仪表面抗原测定,并应用a-FGF、b-FGF、HGF、OSM等多种成分,分阶段向肝细胞定向诱导分化.倒置相差显微镜观察细胞形态变化,取诱导后4 周和6周的细胞分别采用RT-PCR法检测ALB、AFP和CK-19基因mRNA水平,分析类肝细胞诱导表达情况.结果 按108/ml接种,用含15%FBS的DMEM/F12培养基培养可成功获取UBC-MSCs.细胞呈长梭形,细胞表面抗原测定显示强烈表达CD29、CD44,而不表达造血细胞的标志物CD34、CD45.分阶段诱导6周后,细胞形态呈多角形,并检测到肝细胞表面标志物白蛋白、AFP和CK-19.结论 新生儿脐血中可分离出MSCs,并可在体外进行培养扩增,分阶段诱导可分化为类肝细胞.