大鼠海马神经元原代培养方法及缺糖缺氧再灌注损伤模型的建立

摘要

目的 探讨大鼠海马神经元原代培养方法,并建立缺糖缺氧再灌注损伤模型.方法 取新生48h内的大鼠海马组织进行体外原代培养,并进行神经元鉴定.神经元培养第8天,分为对照组、缺糖缺氧组及再灌注损伤组.对照组换Earle's液正常培养;缺糖缺氧组换无糖Earle's平衡盐缓冲液培养并放入缺氧盒内,持续3h缓慢通入95％的N2.再灌注损伤组经过与缺糖缺氧组相同处理后,换以完全培养基置入CO2培养箱孵育,模拟体内缺血再灌注的过程.倒置相差显微镜进行一般形态学的动态观察,采用MTT法测定神经元存活率.结果 经过分类计数,神经元约占97.35％,可认为是较纯的神经细胞培养.对照组神经元存活率为100％,缺糖缺氧组为75.25％士3.12％,再灌注损伤组再灌注12、24 h的神经元存活率分别为63.64％±2.25％、55.37％±1.04％;再灌注损伤组再灌注12、24 h的神经元存活率与对照组和缺糖缺氧组比较,P均＜0.05.结论 成功体外培养海马神经元,并建立大鼠缺糖缺氧再灌注损伤模型.