慢病毒载体PLKO．1-shHIF-2α的构建及鉴定

摘要

目的：构建绿色荧光蛋白（GFP）标记的干涉缺氧诱导因子（HIF）-2α表达的慢病毒载体，并对所得产物进行鉴定。方法体外合成的单链HIF-2α干涉片段经过退火后形成的双链片段和以质粒 PCDH为模板扩增出的EF1-EGFP 均与PLKO．1-puro连接，形成重组的慢病毒载体质粒PLKO．1-shHIF-2α，后者与pMD2G，pSAX2共转染293 FT细胞中进行包装，产生重组慢病毒颗粒。用其感染786-0细胞，检测细胞中GFP表达情况。结果成功扩增出干涉HIF-2α片段和EF1-EGFP片段，酶切鉴定及测序均证实PLKO．1-shHIF-2α质粒构建成功。转染293FT细胞产生的重组慢病毒颗粒感染786-0细胞后高表达绿色荧光。结论成功构建了高效的带GFP报告基因并稳定干涉HIF-2α表达的慢病毒载体。