转染lncRNA Gm15638的小鼠肾小球系膜细胞中FN、ColⅠ表达变化

摘要

目的 观察转染长链非编码RNA (lncRNA) Gm15638的小鼠肾小球系膜细胞SV40-MES13中纤维化标志物纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达变化.方法 采用PCR法扩增lncRNA Gm15638片段,并将其插入pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,构建重组慢病毒载体pCDH-Gm15638.用转染试剂将重组目的质粒pCDH-Gm15638与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞,收集重组慢病毒悬液,测定病毒滴度.将SV40-MES13细胞分为实验组和对照组,分别转染pCDH-Gm15638和慢病毒空载体pCDH-Mock.转染48 h后采用real-time PCR法检测Gm15638验证pCDH-Gm15638转染情况;提取细胞总蛋白,采用Western blotting法检测FN、Col Ⅰ.结果 双酶切鉴定和测序结果显示,重组慢病毒载体pCDH-Gm15638构建成功.通过三质粒包装获得重组慢病毒,测得病毒滴度约6×107 efu/mL.实验组、对照组细胞中Gm15638相对表达量分别为867、1,两组相比,P＜0.05.实验组细胞中FN、Col Ⅰ相对表达量分别为0.739、1.08,对照组分别为0.48、0.845,两组相比,P均＜0.05.结论 转染Gm15638的SV40-MES13细胞中纤维化标志物FN、Col Ⅰ表达水平下调.