pBabe-GLS1真核表达载体构建及其对结肠癌细胞增殖、谷氨酰胺摄取的影响

摘要

目的 构建pBabe-GLS1真核表达载体,观察谷氨酰胺酶1(GLS1)对结肠癌细胞增殖及谷氨酰胺摄取的影响.方法 运用反转录PCR扩增GLS1基因片段,通过BamHⅠ和SalⅠ双酶切目的片段并通过T4 DNA连接酶将GLSⅠ基因连接至pBabe真核表达载体中;经BamHⅠ和SalⅠ双酶切法、PCR法测序鉴定重组DNA分子;转染组将构建的pBabe-GLS1真核表达载体瞬时转染结直肠癌HT29细胞,阴性对照组转染空质粒pBabe,采用Western blotting法检测GLS1蛋白表达,通过谷氨酰胺含量检测试验和蛋白定量实验检测其对结肠癌细胞的生物学影响.结果 成功构建了pBabe-GLS1真核表达载体,且在HT29细胞中高表达GLS1蛋白;转染组HT29细胞增殖能力高于阴性对照组(P<0.05),对谷氨酰胺的摄取能力增加(P<0.05).结论 成功构建了pBabe-GLS1真核表达载体,构建的pBabe-GLS1真核表达载体能促进结肠癌细胞增殖及谷氨酰胺摄取.