自噬对急性肺损伤小鼠肺泡上皮屏障功能的影响及机制探讨

摘要

目的 探讨自噬对急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡上皮屏障功能的影响,并探讨其机制.方法 将40只雄性BALB/c小鼠随机分为C组、LPS组、RAPA+LPS组、3-MA+LPS组,各10只.LPS组、RAPA+LPS组及3-MA+LPS组气管滴入脂多糖(LPS)制备小鼠ALI模型,C组滴入等量生理盐水;在气管滴入LPS前1 h,3-MA+LPS组和RAPA+LPS组分别腹腔预注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,10 mg/kg)和自噬促进剂雷帕霉素(RAPA,5 mg/kg),C组、LPS组腹腔预注射等量生理盐水.造模18 h后处死小鼠,收集标本.HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化;测算肺组织干湿重比(W/D);测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白水平;RT-PCR法检测肺组织中紧密连接蛋白Zo-1、Occludin mRNA;Western blotting法检测肺组织中Zo-1、Occludin及自噬标志蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ.结果LPS组和3-MA+LPS组肺损伤程度较C组明显加重,3-MA+LPS组较LPS组严重,RAPA+LPS组则较LPS组明显减轻.与C组相比,LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平、肺组织中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达高(P均<0.05),肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和蛋白表达低(P均<0.05).与LPS组相比,3-MA+LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平高,肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和Zo-1、Occludin、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达低(P均<0.05);而RAPA+LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平低,肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和Zo-1、Occludin、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达高(P均<0.05).结论 LPS通过降低紧密连接蛋白Zo-1、Occludin的表达导致肺泡上皮屏障破坏,使肺泡上皮屏障功能受损;抑制自噬会进一步减少Zo-1、Occludin的表达,使肺泡上皮屏障功能受损更严重;而促进自噬,则明显增加Zo-1、Occludin的表达,明显改善肺泡上皮屏障功能,从而对肺脏起保护作用.