利多卡因对氧糖剥夺/复氧诱导神经细胞损伤的影响及机制

摘要

目的探讨利多卡因对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导神经细胞损伤的影响及其作用机制。方法常规培养大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞),将培养好的细胞随机分为对照组、模型组、低浓度组、中浓度组、高浓度组、miR-NC+模型组、miR-125b-5p+模型组、anti-miR-NC+高浓度组、anti-miR-125b-5p+高浓度组。对照组常规培养;模型组用OGD/R诱导建立细胞损伤模型;低浓度组、中浓度组、高浓度组分别加入2.5、5、10μmol/L利多卡因培养24 h后进行OGD/R处理;miR-NC+模型组、miR-125b-5p+模型组分别转染miR-NC、miR-125b-5p mimics后,进行OGD/R处理;anti-miR-NC+高浓度组、anti-miR-125b-5p+高浓度组分别转染anti-miR-NC、anti-miR-125b-5p加入浓度为10μmol/L利多卡因培养24 h,然后进行OGD/R处理。用MTT法检测细胞活力[吸光度值(A值)],流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法检测miR-125b-5p表达,Western blotting法检测凋亡相关蛋白[剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、Bcl2关联X蛋白(Bax蛋白)]、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白(p-PI3K、p-Akt蛋白)表达,用微板法、WST-1法及钼酸铵法检测氧化应激相关指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]。结果与对照组比较,模型组细胞活力低(P<0.05);与模型组比较,低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞活力高(P均<0.05);不同浓度组细胞活力(A值)比较差异有统计学意义(P均<0.05)。与对照组比较,模型组细胞凋亡率,Cleaved-caspase-3、Bax相对表达量,MDA水平高(P均<0.05),SOD、CAT水平低(P均<0.05);与模型组比较,低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞凋亡率,Cleaved-caspase-3、Bax蛋白相对表达量,MDA水平低,SOD、CAT水平高(P均<0.05);低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞凋亡率,Cleaved-caspase-3、Bax蛋白相对表达量,MDA水平依次降低(P均<0.05),SOD、CAT水平依次升高(P均<0.05)。与对照组比较,模型组miR-125b-5p相对表达量低(P<0.05);与模型组比较,低浓度组、中浓度组、高浓度组miR-125b-5p相对表达量高(P均<0.05);低浓度组、中浓度组、高浓度组miR-125b-5p相对表达量依次升高(P均<0.05)。与miR-NC+模型组比较,miR-125b-5p+模型组细胞活力(A值)高,细胞凋亡率及Cleaved-caspase-3、Bax蛋白相对表达低,MDA水平低,SOD、CAT水平高(P均<0.05)。与anti-miR-NC+高浓度组比较,anti-miR-125b-5p+高浓度组细胞活力(A值)低,细胞凋亡率及Cleaved-caspase-3、Bax蛋白相对表达量高,MDA水平高,SOD、CAT水平低(P均<0.05)。结论利多卡因可通过上调miR-125b-5p表达促进OGD/R诱导的神经细胞增殖,抑制细胞凋亡及氧化应激反应,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。