粪肠球菌感染小鼠单核巨噬细胞外泌体分泌量及其在人源性肠上皮细胞中的传递情况观察

摘要

目的观察粪肠球菌OG1RF感染小鼠单核巨噬细胞raw264.7的外泌体分泌量,进一步观察OG1RF感染的raw264.7细胞分泌的外泌体在人源性肠上皮细胞NCM460中的传递情况。方法取raw264.7细胞分为A、B两组。其中A组加入OG1RF感染1 h,后加入DMEM完全培养基继续培养;B组为对照组,不进行处理。培养24 h时,收集细胞上清液,提取鉴定外泌体,BCA法测算两组外泌体含量,观察外泌体分泌情况。取raw264.7细胞,5×10^(5)/孔的密度铺至6孔板过夜后,分为1、2、3组,三组加入OG1RF感染1 h,然后1、2组分别加入DMSO+10μmol/L的外泌体抑制剂GW4869、DMSO+20μmol/L GW4869,对照组加入同体积DMSO,培养24 h时测算三组上清液外泌体含量,观察外泌体分泌情况。取A组提纯后外泌体,加入4μmol/L的PKH67标记,将标记后外泌体与人源性肠上皮细胞NCM460细胞共同培养3 h,电镜下观察NCM460细胞中的外泌体情况,观察外泌体在NCM460细胞中的传递情况。结果培养24 h时,A、B组细胞上清液外泌体含量分别为(0.783±0.07)、(0.123±0.056)μg,二者比较,P<0.05;1、2、3组细胞上清液外泌体含量分别为(0.592±0.06)、(0.488±0.09)、(0.778±0.07)μg,与3组比较,1、2组细胞上清液外泌体含量低(P均<0.05);与1组比较,2组细胞上清液外泌体含量低(P<0.05)。OG1RF感染raw264.7细胞后分泌的外泌体可进入NCM460细胞质中。结论OG1RF感染可促进raw264.7细胞外泌体的分泌,该作用可被GW4869抑制。OG1RF感染后raw264.7细胞分泌的外泌体可进入NCM460细胞中。