miR-181 a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用

摘要

目的 探讨miR-181a对过氧化氢(H2O2)诱导的人小梁网细胞(HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制.方法 HTMCs随机分为空白组(0μmol·L-1 H2 O2)、200μmol·L-1 H2 O2组、400μmol·L-1 H2 O2组、600μmol·L-1 H2 O2组,分别使用相应浓度H2 O2处理HTMCs,24 h后MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-181a mRNA表达,Western blot检测各组细胞中沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)蛋白表达.根据转染物的不同分为miR-181a inhibitor组、miR-181a NC组、miR-181a mimics组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组和miR-181a inhibitor+si-NC组,使用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞内活性氧(ROS)含量,使用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)ELISA试剂盒检测各组细胞SOD和MDA活性,使用Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中SIRT1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证.结果 与空白组比较,200μmol·L-1 H2 O2组、400μmol·L-1 H2 O2组、600μmol·L-1 H2 O2组细胞存活率均降低(均为P<0.05).细胞miR-181a mRNA的表达随着H2O2浓度的增加而增加,SIRT1蛋白的表达随着H2O2浓度的增加而降低(均为P<0.05).与miR-181a NC组比较,miR-181a mimics组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均降低,miR-181a inhibitor组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均降低,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均升高(均为P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a靶向抑制SIRT1蛋白的表达.与miR-181a inhibitor+si-NC组比较,miR-181a inhibitor+si-SIRT1组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,SOD活性降低(均为P<0.05).结论 miR-181a可能通过靶向SIRT1调节H2O2诱导的HTMCs氧化应激作用.