华支睾吸虫γ-谷氨酰转移酶7基因的原核表达及反应原性分析

摘要

γ-谷氨酰转移酶7(GGT7)是华支睾吸虫生长发育的各个时期都存在且高表达的蛋白,为探索其作为诊断抗原的潜能,依据GenBank中华支睾吸虫GGT7基因序列,设计了特异性引物,并构建了pET-32a-GGT7重组表达质粒转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞中,进行蛋白表达和反应原性分析。生物分子信息学分析显示,GGT7具有7个α-螺旋和6个β-折叠,B细胞抗原基因表位较多。扩增得到的华支睾吸虫GGT7基因大小为1773 bp,编码591个氨基酸,SDS-PAGE分析在65 ku分子处有明显的目的蛋白条带,Western blot检测表明该蛋白具有较好的反应原性。首次对华支睾吸虫GGT7基因进行了克隆表达,并证明目的蛋白具有良好的反应原性,为华支睾吸虫病诊断试剂的研发奠定了基础。