猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达及其促淋巴细胞增殖活性测定

摘要

根据GenBank上公布的猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(pGM-CSF)基因序列(U67175.1)扩增该基因,克隆至pET30b载体,构建重组表达载体pET30b-pGM-CSF,并与分子伴侣辅助质粒pG-KJE8共同转化E.coli BL21 (DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE分析,可见表达的目的蛋白大小约为23 ku,主要以包涵体形式存在,且在分子伴侣的辅助下,增大了可溶性蛋白的表达量.经镍离子亲和层析纯化后,通过淋巴细胞增殖试验初步检测了pGM-CSF蛋白促进淋巴细胞增殖的活性.结果表明,猪GM-CSF具有明显的体外刺激淋巴细胞增殖的生物学活性,为进一步研究猪GM-CSF的生物学功能以及临床应用奠定了基础.