HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

摘要

目的为了研究HIV-1p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1p15(Gag)蛋白及其特异性抗体。方法用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达HIV-1p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的蛋白。以纯化目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28a(+)-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。