颅底脊索瘤中长链非编码RNA FAM230B的促肿瘤作用及机制研究

摘要

目的筛选颅底脊索瘤中的关键长链非编码RNA(lncRNA),并探讨其促肿瘤作用及机制。方法选择在首都医科大学附属北京天坛医院临床医学研究中心存放的3份脊索瘤组织样本和3份脊索组织样本,进行lncRNA测序,筛选与肿瘤发生发展关系密切的lncRNA。采用笔者所在课题组自行培育的颅底脊索瘤细胞系HBC-2进行细胞培养及转染,其中FAM230B敲降组采用si-FAM230B进行细胞转染,对照1组采用si-FNC进行细胞转染,AC079630.2敲降组采用si-AC079630.2进行细胞转染,对照2组采用si-ANC进行细胞转染。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。选择2005-2014年在首都医科大学附属北京天坛医院神经外科接受手术治疗的原发颅底脊索瘤患者83例,收集患者的临床资料。原发颅底脊索瘤患者术后肿瘤进展的影响因素分析采用单因素及多因素Cox回归分析。应用AnnoLnc数据库筛选与FAM230B相互作用的蛋白,采用RNA pull-down实验和Western blot法检测结合蛋白表达情况。结果lncRNA测序结果显示,筛选后获取2153个lncRNA集,包括差异表达lncRNA 169个,其中显著高表达lncRNA 11个、显著低表达lncRNA 4个。功能测序结果显示,共两个lncRNA(FAM230B和ACO79630.2)与肿瘤发生发展密切相关。FAM230B敲降组培养24、48、72 h细胞活性低于对照1组,细胞凋亡率高于对照1组(P0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,FAM230B水平是原发颅底脊索瘤患者术后肿瘤进展的独立影响因素〔HR=0.749,95%CI(0.616,0.912),P<0.05〕。与FAM230B相关的PTEN蛋白得分较高(96.0251分,P=1.14e-3)。RNA pull-down实验结果显示,FAM230B可与PTEN蛋白直接结合。Western blot法结果显示,干扰前后实验组PTEN蛋白条带无明显变化;与干扰前相比,干扰后实验组PTEN通路关键蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)条带明显减弱,提示采用FAM230B干扰后细胞中p-AKT表达降低。结论lncRNA FAM230B在颅底脊索瘤组织中呈高表达,其可与PTEN蛋白结合,导致AKT磷酸化水平升高,进而发挥促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡的作用。