miRNA-652在血管平滑肌细胞增殖中的作用及可能机制

摘要

目的 探讨miRNA-652在血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用及可能机制。方法 本实验时间为2019年1月至2020年7月。采用不同浓度(0、1、10、100 nmol/L)的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激VSMCs 24 h后,检测miRNA-652表达情况,确定10 nmol/L AngⅡ为最佳刺激浓度。采用10 nmol/L AngⅡ分别刺激VSMCs 0、6、12、24 h后,检测miRNA-652表达情况,确定AngⅡ最佳刺激时间为24 h。将VSMCs随机分为miRNA-652模拟物组、模拟物对照组、miRNA-652抑制剂组、抑制剂对照组,分别转染miRNA-652 agomir、agomir NC、miRNA-652 antagomir及antagomir NC 24 h/48 h。采用qRT-PCR检测VSMCs中miRNA-652、NPTN mRNA相对表达量,采用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力(相对吸光度)。通过miRNA靶基因预测数据库miRDB、TargetScan、miRTarBase在线进行生物信息学分析。为了验证NPTN是miRNA-652的靶基因,将含有miRNA-652结合位点的NPTN 3’UTR克隆到报告基因载体pmirGLO中,构建野生型pmirGLO-NPTN 3’UTR-WT和突变型pmirGLO-NPTN 3’UTR-MUT,并分别与寡核苷酸miRNA-652 agomir、miRNA-652 antagomir、agomir NC及antagomir NC共转染293 T细胞,转染48 h后测定荧光素酶相对活性。结果 转染24 h后,miRNA-652模拟物组miRNA-652相对表达量高于模拟物对照组,相对吸光度低于模拟物对照组(P<0.05);miRNA-652抑制剂组miRNA-652相对表达量低于抑制剂对照组,相对吸光度高于抑制剂对照组(P<0.05)。生物信息学分析结果显示,3个数据库均检测到NPTN是miRNA-652的靶基因。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染48 h后,miRNA-652模拟物组pmirGLO-NPTN 3’UTR-WT荧光素酶相对活性低于模拟物对照组(P<0.05)。转染48 h后,miRNA-652模拟物组NPTN mRNA相对表达量低于模拟物对照组,miRNA-652抑制剂组NPTN mRNA相对表达量高于抑制剂对照组(P<0.05)。结论 过表达miRNA-652可以抑制VSMCs增殖,而抑制miRNA-652可以促进VSMCs增殖;miRNA-652对NPTN具有负调控作用,其可能通过调控靶基因NPTN而影响VSMCs增殖。