调控线粒体钙离子摄入蛋白1表达对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

摘要

目的探讨调控线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)表达对血管内皮细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及机制。方法本研究时间为2021年12月至2022年7月。将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分成对照组和模型组,对照组细胞正常培养,不加任何干预;模型组细胞构建H/R损伤模型,检测各组MICU1 mRNA、蛋白。将HUVECs分成对照组、siCtrl+模型组及siMICU1+模型组,对照组细胞正常培养,不加任何干预;siCtrl+模型组细胞转染对照小干扰RNA后构建H/R损伤模型;siMICU1+模型组细胞转染MICU1小干扰RNA后构建H/R损伤模型。检测各组MICU1蛋白、活性氧(ROS)、NF-κB p65蛋白、炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)]。将HUVECs分成对照组、Ad-Ctrl+模型组及Ad-MICU1+模型组,对照组细胞正常培养,不加任何干预;Ad-Ctrl+模型组细胞感染对照腺病毒后构建H/R损伤模型;Ad-MICU1+模型组细胞感染MICU1腺病毒后构建H/R损伤模型,检测各组MICU1蛋白、ROS、NF-κB p65蛋白、炎性因子(TNF-α和IL-6)及细胞凋亡率。将HUVECs分成siCtrl+模型组、siMICU1+模型组及siMICU1+N,N’-二甲基硫脲(DMTU)+模型组,siCtrl+模型组细胞转染对照小干扰RNA后构建H/R损伤模型;siMICU1+模型组细胞转染MICU1小干扰RNA后构建H/R损伤模型;siMICU1+DMTU+模型组细胞转染MICU1小干扰RNA后加入ROS清除剂DMTU,并构建H/R损伤模型。检测各组NF-κB p65蛋白、炎性因子(TNF-α和IL-6)及细胞凋亡率。结果模型组MICU1 mRNA、蛋白低于对照组(P<0.05)。siCtrl+模型组MICU1蛋白低于对照组,ROS、NF-κB p65蛋白、TNF-α、IL-6高于对照组(P<0.05);siMICU1+模型组MICU1蛋白低于siCtrl+模型组,ROS、NF-κB p65蛋白、TNF-α、IL-6高于siCtrl+模型组(P<0.05)。Ad-Ctrl+模型组MICU1蛋白低于对照组,ROS、NF-κB p65蛋白、TNF-α、IL-6、细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);Ad-MICU1+模型组MICU1蛋白高于Ad-Ctrl+模型组,ROS、NF-κB p65蛋白、TNF-α、IL-6、细胞凋亡率低于Ad-Ctrl+模型组(P<0.05)。siMICU1+模型组NF-κB p65蛋白、TNF-α、IL-6、细胞凋亡率高于siCtrl+模型组,siMICU1+DMTU+模型组NF-κB p65蛋白、TNF-α、IL-6、细胞凋亡率低于siMICU1+模型组(P<0.05)。结论下调MICU1表达可诱导内皮细胞H/R损伤模型发生炎症反应及细胞凋亡,而上调MICU1表达的作用相反,分析其机制可能与调控MICU1表达可影响依赖ROS的NF-κB通路激活有关。