引起浙贝母黑斑病的交链格孢单抗及检测试纸条的制备

摘要

浙贝母黑斑病是危害浙贝母茎叶的重要真菌性病害之一,该病侵染叶片产生叶斑、叶枯,严重时全株枯死。本研究制备了针对浙贝母黑斑病致病菌交链格孢Alternaria alternata的单克隆抗体(单抗),并开发了胶体碳免疫层析试纸条用于黑斑病早期精准检测。以交链格孢提取液免疫Bal b/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单抗,间接ELISA法和Western blot分析单抗的效价、灵敏度、特异性、抗体类型及结合蛋白。以双抗夹心法制备胶体碳免疫层析试纸条。得到3种针对交链格孢的单抗及其杂交瘤细胞株AaA1、AaC2和AaC5。3种单抗对交链格孢均具有高度特异性,灵敏度为12.21~24.41 ng/mL,效价≥6.40×10^(5),抗体类型分别为IgG2a、IgG3和IgG3,结合蛋白的分子量分别为37、62 kDa和66 kDa。以AaA1为碳标单抗,AaC2为划膜单抗的胶体碳试纸条检测交链格孢的方法快速简便、准确灵敏、经济环保。从田间采样到出结果用时少于15 min,样品简单研磨后取汁液加入加样孔即完成全部操作,对交链格孢抗原的检测灵敏度为6.25μg/mL,试纸条采用环保材料制备,单个试纸条的成本约1.7元。