转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立

摘要

为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法.结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10 μg/mL,检测抗体浓度1.25 μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37°C共同孵育60 min.该方法的检测范围为0.312 5～80 μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10～80倍稀释;板内变异系数为1.64％～5.42％,板间变异系数为3.05％～9.13％,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100％,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性.该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础.