别藻蓝蛋白基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达

摘要

采用亚克隆方法,将别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)基因插入到毕赤酵母整合型表达载体pPIC6αA中,再用Sac Ⅰ线性化,纯化后,用氯化锂法转化毕赤酵母菌株X-33,筛选表达APC的重组子.PCR和序列分析表明,APC基因已整合到酵母染色体中.重组子经甲醇诱导,用Western blotting在培养基上清液检测到APC,表明别藻蓝蛋白(APC)在毕赤酵母中可以表达.APC由两种亚基组成,分子量分别为19kDa和21kDa.重组子经摇瓶培养48h表达量达4.4mg/L.