RNA干扰神经纤毛蛋白-2基因对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响

摘要

目的探讨应用RNAi技术降低神经纤毛蛋白-2（NRP-2）表达后对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响。方法通过脂质体lip2000分别将NRP2-siRNA和NControl-siRNA转染入HCT-8中作为转染组和阴性对照组,加入磷酸盐缓冲液作为空白对照组,通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western印迹法验证转染效果,采用细胞计数试剂盒（CCK）法、平板克隆实验和Ki-67蛋白染色实验检测3组细胞的增殖情况,吖啶橙/碘化丙啶（AO/PI）荧光染色实验检测3组细胞的凋亡情况。结果 RT-qPCR和Western印迹法结果表明转染组细胞NRP-2 mRNA相对表达量和NRP-2蛋白含量降低（0.46±0.05比0.99±0.05和1.00±0.06,1.04±0.06比1.73±0.09和1.65±0.11）（均P＆0.05）,CCK法表明,转染组各时段的增殖能力较阴性对照组和空白对照组显著降低（24 h为0.53±0.04比0.82±0.07和0.87±0.07,48 h为0.54±0.05比1.00±0.09和1.17±0.05,72 h为0.75±0.05比1.31±0.13和1.50±0.03,96 h为1.05±0.04比1.46±0.09和1.86±0.06）（均P＆0.05）;平板克隆实验显示转染组细胞较其他两组克隆形成能力显著下降（134.67±8.74比245.33±19.14和300.33±14.01,P＆0.05）;Ki-67蛋白检测显示与对照组相比,转染组的细胞Ki-67含量显著下降（5.93±0.22比8.36±0.09和8.70±0.21,P＆0.05）;AO/PI实验显示转染组较对照组相比凋亡细胞/活细胞比例显著上升（0.43±0.07比0.14±0.04和0.11±0.04,P＆0.05）。结论降低NRP-2表达可使结肠癌细胞HCT-8的增殖能力下降,凋亡能力上升。