晚期糖基化终产物通过p38信号通路抑制内皮细胞合成一氧化氮的研究

摘要

目的研究晚期糖基化终产物(AGE)修饰蛋白对内皮细胞生成一氧化氮(NO)的作用及p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路在此病理过程中的作用.方法用来自培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人内皮细胞株ECV304.将内皮细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白(AGE-HSA)、AGE修饰牛血清白蛋白(AGE-BSA)在体外共同培养.用Griess法检测培养上清的NO水平; 用免疫沉淀-激酶活性测定法测定细胞p38-MAPK活性.结果 AGE-HSA和AGE-BSA以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞生成NO,同时导致p38信号通路激活;未经修饰的HSA和BSA无此作用,AGE-HSA和AGE-BSA的抑制作用亦无明显差异(P>0.05);p38通路特异阻断剂SB 203580完全阻断AGE修饰蛋白对内皮细胞生成NO的抑制效应,提示AGE修饰蛋白对内皮细胞的这一生物学作用是由p38通路介导的.AGE修饰蛋白激活HUVEC p38通路.在AGE修饰蛋白作用10 min时,p38激酶磷酸化活性明显升高,在30 min时到达高峰,在120 min时回到基础水平.p38磷酸化激酶的磷酸化作用随着AGE修饰蛋白浓度的增高而加强.以ECV304细胞株为靶细胞时,AGE修饰蛋白对p38通路的活化作用与对HUVEC相同.AGE-BSA对内皮细胞p38通路的活化作用与AGE-HSA相同.结论本研究证实,AGE修饰蛋白能够通过p38通路介导的途径抑制内皮细胞生成NO,这一作用可能参与了AGE相关性疾病血管病变的发生、发展.