人胚胎干细胞系的初步建立

摘要

目的探讨用人受精卵建立人胚胎干细胞系.方法将体外受精获得的人受精卵发育至胚泡期,用机械法去除胚泡透明带后,取出内细胞团,分散后接种在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,进行传代培养.通过碱性磷酸酶染色、胚胎干细胞特异性表面标志物检测、染色体核型分析和严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内畸胎瘤形成实验,对连续传代的细胞进行鉴定.结果 9枚受精卵在体外培养5～7 d后,5个存活并发育为胚泡,取出的内细胞团经接种培养,3个内细胞团存活,呈克隆性生长,发育为胚胎干细胞,并连续体外传代7个月保持未分化状态,建系成功.3个细胞系分别命名为CHE1、CHE2和CHE3.取3个细胞系第5、15和30代的细胞进行碱性磷酸酶染色,均为阳性.对CHE3第25、30、40代、CHE1和CHE2第21、22、30代的细胞检测人胚胎干细胞表面标志SSEA-4、SSEA-3、TRA-1-60和GCTM-2,结果均为阳性;检测小鼠胚胎干细胞表面标志SSEA-1,结果为阴性.染色体核型分析为二倍体核型.将连续传代5个月后(30代左右)的3个细胞系接种到SCID小鼠体内,6周后均形成畸胎瘤,组织病理学检查显示含有3个胚层的组织结构.结论使用5个人受精卵来源的胚泡,成功地在体外建立了3个胚胎干细胞系,长期传代后仍保持胚胎干性和多向分化的能力.