人p53四价功能域对提高抗体功能性亲和力的作用

摘要

目的探讨人p53四价功能域在提高抗体功能性亲和力和生物学活性方面的的作用.方法利用基因克隆技术,将人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因与前列腺癌/抗CD3双特异性单链抗体基因融合,构建多价抗体(mBsAb),测序正确后,将其亚克隆入真核表达载体进行表达,纯化表达产物,并利用流式细胞仪及51Cr释放试验进行生物学活性测定.结果经酶切、测序分析证实mBsAb构建成功,其真核表达产物分泌于细胞培养上清,相对分子量为67 000,mBsAb与PBMC和PC-3细胞的阳性结合率分别为70.4%和81%,明显高于BsAb组.51Cr释放试验结果显示, mBsAb激活的T细胞可以裂解PC-3细胞,裂解百分率明显高于IL-2组和BsAb组.结论人IgG3上游铰链区/p53四价功能域基因与抗前列腺癌/抗人CD3双特异性单链抗体基因融合后表达产物的功能性亲和力和生物学活性大大提高,为提高抗体的功能性亲和力和生物学活性开辟了新的思路.