人黑皮素4受体F261S突变基因的克隆和功能验证

摘要

目的研究黑皮素4受体(MC4R)基因的新突变F261S是否造成了MC4R蛋白功能改变.方法用携带F261S纯合突变的先证者及正常人的基因组DNA,PCR扩增突变型及野生型MC4R基因全长,克隆到topo-TA真核表达质粒载体,测序鉴定后转染人胚肾293细胞.用浓度为1×10-11～1×10-5 mmol/L的α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)与表达的MC4R蛋白结合后,用双荧光素酶报告基因测试系统检测胞内cAMP,萤火虫荧光/海洋腔肠荧光二者强度之比体现了cAMP浓度.结果α-MSH浓度在1×10-9～1×10-8 mmol/L时野生型胞内双荧光强度比值显著高于突变型细胞(P<0.05),在1×10-7～1×10-5 mmol/L时差异更为显著(P<0.01).结论 F261S突变使MC4R介导的信号转导能力下降,此突变与中国人早发性肥胖有关.