宫颈癌癌前病变中人乳头状瘤病毒16整合状态的检测

摘要

目的探讨宫颈癌癌前病变中人乳头状瘤病毒(HPV)16 DNA整合入宿主基因组的发生情况.方法选取108例细胞学为宫颈癌癌前病变的患者,应用多重聚合酶链反应(PCR)同时检测液基细胞标本中的HPV16 L1、E2和E6基因.采用通用引物GP5+/GP6+扩增HPV L1基因保守区的一个长150 bp的片断,以检测HPV的存在.E2 PCR引物目标是HPV整合时最常缺失的E2开放阅读框(ORF)的特殊区域,E6引物目标是E6 ORF.在游离型中,E2、E6拷贝数比例相等;在整合型中,E2缺失;在游离、整合的混合型中,E2的拷贝数少于E6.对E2、E6的PCR产物凝胶电泳条带的面积灰度值进行半定量分析,从而确定HPV16的整合状态.结果 HPV感染者62例(57.41%);HPV16感染者32例(29.63%),其中15例(46.88%)为纯游离型;13例(40.62%)为混合型;4例(12.50%)为纯整合型.HPV16 DNA整合和/或混合型的比例随宫颈病变级别升高而增加,不同病变之间差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPV16整合入宿主基因组在部分宫颈上皮内瘤变中即已发生.多重PCR同时检测HPV L1、HPV16 E2、E6基因以及E2/E6比值,是一种在宫颈细胞学标本中同时检测HPV感染、HPV16感染和HPV16整合状态的简便方法.它可以作为细胞学筛查的一种补充手段,以发现向宫颈高度鳞状上皮内病变、宫颈癌发展的高危患者.