myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用

摘要

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记）纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用:RNA干扰（RNAi）技术构建psimyocardin RNA表达载体抑制myocardin基因的表达。细胞分为常氧组（含21％O2,5％CO2和74％N2）、低氧组（含1％O2,5％CO2, 94％N2）、常氧+myocardin抑制组和低氧+myocardin抑制组,分别培养1 d、4 d和7 d。用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测myocardin mRNA的表达;免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌（α-SM）肌动蛋白的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化。结果（1）免疫荧光检测PAEC中α-SM-肌动蛋白阳性率在低氧4 d组（0．96‰±0．08‰）明显低于7 d组（2．07‰±0．06‰,P＜ 0．01）,阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1 d组均未见α-SM-肌动蛋白的阳性表达;（2）RT- PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4 d组（0．14±0．01）明显低于低氧7 d组（0．23±0．03, P＜0．01）,常氧组和低氧1 d组均未检测出其表达。（3）RNAi沉默myocardin基因表达后,其mRNA水平明显低于对应的低氧4 d组（0．03±0．02）和低氧7 d组（0．05±0．01,P＜0．01）;平滑肌样细胞的转分化率也明显降低（0．19‰±0．07‰,0．21‰±0．04‰,P＜0．01）。以上每组重复3次。结论PAEC中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能,低氧可明显促进其转分化,myocardin在此转分化过程中起重要作用。