凋亡蛋白Bax在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞耐药中的调节作用

摘要

目的探讨凋亡蛋白 Bax 在恶性淋巴瘤细胞对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）凋亡抵抗中的调节作用,为临床克服肿瘤耐药提供治疗靶点。方法分别采用500μg/L TRAIL 和/或10 nmol/L 蛋白酶体抑制剂 PS-341处理恶性淋巴瘤细胞（CRL）和正常对照细胞（HRC）。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。荧光显色技术检测细胞半胱氨酸蛋白水解酶-8酶活性。Western 印迹检测细胞中 Bax 蛋白表达水平。免疫沉淀技术（IP）检测 Bax 蛋白的活性及构象变化。结果与 HRC 细胞比较,CRL 细胞对 TRAIL 存在显著抵抗,24 h 凋亡指数仅为21%,前者为32%,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）;同时在 TRAIL 作用过程中 CRL 细胞中 Bax 表达呈下降趋势,24 h 表达量仅为正常量的5/17。当联合使用 PS-341后,可有效抑制 Bax 蛋白降解,6 h 表达量为正常量的1.2倍,显著增加活性;同时增加半胱氨酸蛋白酶-8酶活性,6 h 为26.5 μmol·L-1·h-1·mg-1蛋白,从而增加细胞凋亡,6 h 凋亡指数达54%,与对照组比较差异均有统计学意义（均 P＜0.01）。结论促凋亡蛋白 Bax 的下调表达参与恶性淋巴瘤细胞对 TRAIL 耐药性。合理的使用蛋白酶体抑制剂可通过抑制蛋白降解,增加其活性来有效克服肿瘤耐药。