联合自杀基因及内皮抑素基因双靶点治疗膀胱癌的实验研究

摘要

目的探讨基因重组腺相关病毒自杀基因及内皮抑素（ES）联合基因治疗膀胱癌的效果。方法（1）通过重组腺相关病毒（rAAV）-增强绿色荧光蛋白（EGFP）转染膀胱肿瘤 T24细胞,来确定 rAAV 对该细胞的转染情况及转染效率;（2）通过 rAAV-胸苷激酶（TK）-核糖体插入位点（IRES）-ES （简称 rAAV-TIE）体外转染 T24膀胱肿瘤细胞及人脐静脉内皮细胞（HUVEC 细胞）,应用MTT 法、流式细胞仪等方法来检测其对 T24细胞及 HUVEC 细胞凋亡的诱导作用;（3）构建裸鼠膀胱癌模型,分析 rAAV-TIE 联合基因治疗膀胱癌的体内效果。结果（1）rAAV-EGFP 转染 T24细胞后可以表达携带的外源基因 EGFP;（2）rAAV-TK、rAAV-TIE 转染 T24细胞72 h 后,流式细胞仪检测结果显示,rAAV-TK、rAAV-TIE 两组凋亡率分别是34.12%和36.9l%,明显高于空病毒转染组[rAAV-多克隆位点（MCS）组]（3.08%）和空白对照组（0.84%）;（3）瘤内注射 rAAV-ES、rAAV-TK、rAAV-TIE大约9 d 后,肿瘤生长受到显著抑制,治疗结束后:各组肿瘤的体积分别是:rAAV-ES 组（0.75±0.08）cm~3、rAAV-TK 组（0.71±0.11）cm~3、rAAV-TIE 组（0.52±0.09）cm~3、rAAV-MCS 组（1.27±0.13）cm~3和空白对照组（1.24±0.17）cm~3,除 rAAV-ES 组与 rAAV-TK 组间比较差异无统计学意义外,其余组间比较差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。结论体外和体内实验表明 rAAV-TIE 可有效抑制膀胱癌的血管生成和肿瘤的生长,能够双靶点基因治疗膀胱肿瘤。