静电纺丝血管外支架缓释siRNA纳米粒抑制静脉移植物内膜增生

摘要

目的评价聚（乳酸-羟基乙酸）共聚物/壳聚糖（PLGA/CS）纳米粒超细纤维复合膜血管外支架缓释组织因子小干扰RNA（TFsiRNA）抑制静脉移植物内膜增生的有效性。方法使用改进静电纺丝技术制备PLGA/CS纳米粒超细纤维复合膜。氯仿溶解复合膜PLGA后测量壳聚糖含量,检测超细纤维复合膜吸水率。建立SD大鼠右颈外静脉-颈总动脉间置移植模型,随机分为5组:A组（PILGA/CS-TFsiRNA纳米粒外支架组）,B组（PLGA/CS-StealthTM RNA阴性对照纳米粒外支架组）,C组（PLGA/CS空白纳米粒外支架组）,D组（PLGA外支架组）,E组（无外支架组）。BLOCK-iTM荧光寡核苷酸检测静脉移植物转染。分别于术后1、3、7、14、28 d取标本。免疫印迹和免疫组化检测管壁组织因子蛋白表达,免疫组化检测管壁增殖细胞核抗原表达,计算机图像系统分析新生内膜厚度。结果通过调节静电纺丝PLGA和壳聚糖纳米粒溶液流量控制复合膜中PLGA和壳聚糖含量。复合膜由于加入壳聚糖具有良好吸水性。术后12 d静脉移植物管壁可检测BLOCK-iTM荧光寡核苷酸绿色荧光。术后3、7 d,A组组织因子蛋白表达明显低于其他组（P＜0.05,其中术后3 d分别为0.40±0.03与0.75±0.01、0.75±0.05、0.77±0.07,术后7 d分别为0.30±0.03与0.84±0.05、0.86±0.06、0.85±0.06）,术后14 d,A组增殖细胞核抗原表达明显低于其他组（P＜0.01,13.0%±2.6%与25.0%±2.8%、24.2%±3.9%、24.0%±4.1%、44.8%±3.7%）,A组术后28 d新生内膜厚度明显低于未治疗组,P＜0.01,（18.8±2.9）μm与（38.7±5.0）μm、（37.3±3.6）μm、（37.2±2.6）μm、（67.5±4.8）μm。结论静电纺丝制备PLGA/CS纳米粒超细纤维复合膜血管外支架缓释组织因子siRNA能有效抑制大鼠静脉移植物早期内膜增生,这将成为基因治疗静脉移植物狭窄一种新方法。