单个shRNA质粒同时抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位和雄激素受体的表达

摘要

目的探讨单个shRNA质粒联合抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位（hTERT）和雄激素受体（AR）基因表达的可行性。方法使用RNAi-DNA载体技术,将hTERT和AR siRNA的DNA模板同时插入到载体Pgenesil,构建成重组质粒Pgenesil-hTERT-AR-shRNA,转染至LNCaP细胞,与空白对照、Pgenesil-HK-shRNA（通用阴性质粒）、Pgenesil-hTERT-shRNA和Pgenesil-AR-shRNA比较,利用实时荧光定量PCR技术观察其对LNCaP细胞hTERT和AR基因mRNA表达的影响。采用Annexin V方法检测细胞凋亡,MTT比色分析法测定细胞增殖活性。结果空白对照组、Pgenesil-HK-shRNA组、Pgenesil-hTERT-shRNA组、Pgenesil-AR-shRNA组和Pgenesil-hTERT-AR-shRNA组细胞的hTERT基因mRNA分别为（1.51±0.08）×10~8、（7.32±0.43）× 10~7、（2.94±0.15）×10~6、（4.45±0.25）×10~7、（3.17±0.18）× 10~6（copies/ml）,各组AR基因mRNA分别为（1.92±0.11）×10~5、（6.47±0.32）× 10~5、（3.70±0.24）× 10~4、（1.22±0.06）× 10~4、（7.21±0.41）× 10~3（copies/ml）,提示Pgenesil-hTERT-shRNA对hTERT基因mRNA有抑制作用,Pgenesil-AR-shRNA对AR基因mRNA有抑制作用,Pgenesil-hTERT-AR-shRNA对hTERT和AR基因mRNA都有抑制作用（P＜0.05）。Pgenesil-hTERT-AR-shRNA与Pgenesil-hTERT-shRNA、Pgenesil-AR-shRNA比较,引起的细胞凋亡、细胞生长抑制更加明显（P＜0.05）。结论含有hTERT-shRNA和AR-shRNA DNA模板的重组表达质粒Pgenesil-hTERT-AR-shRNA能够明显抑制hTERT和AR基因的表达和前列腺癌细胞的生长。