抗血小板膜糖蛋白Ibα胞内段多肽多克隆抗体的制备及初步应用

摘要

目的制备兔抗人血小板膜糖蛋白（GP）Iba C端557～561氨基酸序列多肽的多克隆抗体,并初步用于人血小板GPIba C端559位丝氨酸磷酸化状态的检测。方法应用化学方法合成C-R-G-S-L-P（559位丝氨酸非磷酸化,Ser559）和C-R-G-S（p）一L-P（559位丝氨酸磷酸化,pSer559）多肽。将2种多肽分别与钥孔（虫戚）血蓝蛋白交联后,以皮下注射法分别免疫新西兰大白兔,分离获得2种抗血清（抗Ser559多抗和抗pSer559多抗）。应用斑点印迹和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对抗血清进行鉴定并检测效价。从人血小板裂解液中分离纯化血小板GPIba仪,利用抗Ser559多抗和抗pSer559多抗、采用ELISA方法检测人血小板GPIbaC端559位丝氨酸磷酸化状况。结果所制备的2种多抗分别特异性识别各自抗原,效价分别为1:32 000和1:64 000。2种多抗均可与纯化的人血小板GPIba特异结合,表明人血小板GPIba 559位点丝氨酸存在磷酸化与非磷酸化两种状态。结论应用人工合成多肽成功制备出2种可特异性识别丝氨酸磷酸化状态的兔抗人血小板GPIba胞内段多肽多抗,并证明人血小板GPIba C端559位丝氨酸存在磷酸化状态。