人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老及其相关机制

摘要

目的探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞（HSC）衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法提供理论指导和实验依据。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC后分5组:对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组。β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察Rg1延缓Sca-1+ HSC衰老的生物学作用。反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA的表达。Western印迹检测p16INK4a、p21Cipl/Wafl、细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、CDK2蛋白表达。结果 Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1+ HSC的SA-β-Gal染色阳性率（30.1%±2.4%,21.5%±2.8%）低于衰老组（69.5%±5.0%）;G1期细胞比例（81.4%±1.2%,78.2%±1.4%）低于衰老组（87.5%±4.0%）;生成CFU-Mix数[（8.0±2.2）个/10~4 Sca-1+ HSC、（9.2±1.8）个/10~4 Sca-1+ HSC]高于衰老组[3.0±1.6)个/10~4 Sca-1+ HSC];Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1+ HSC的p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA及p16INK4a、p21Cipl/Wafl、cyclinD1蛋白表达均下调（均P＜0.01）,CDK4、CDK2、cyclinE蛋白表达均上调（均P＜0.01）。Rg1延缓衰老组各检测指标均较Rg1治疗组变化明显。结论 Rg1具有延缓及治疗Sca-1+ HSC衰老的作用,p16INK4a-Rb及p19Arf-Mdm2-p53-p21Cipl/Wafl信号通路在其中可能发挥重要作用。