FAM172A蛋白对人胚胎肾细胞凋亡及增殖的影响

摘要

目的研究与糖尿病大血管病变有关的新蛋白FAM172A对人胚胎肾细胞（HEK293细胞）凋亡及增殖的影响。方法以前期研究工作中所构建的pDrive-FAM172A质粒为模板,通过PCR方法扩增出人FAM172A基因编码框,将扩增产物亚克隆到PDC315真核表达载体,经酶切、测序鉴定,选择插入序列正确的PDC315-FAM172A质粒用脂质体2000转染HEK293细胞,同时用PDC315空质粒作为对照转染HEK293细胞。用噻唑蓝（XTT）法、生长曲线法观察过表达FAM172A基因对HEK293细胞增殖的影响。用碘化丙啶（PI）单染色法、膜联蛋白V/PI双染色法观察过表达FAM172A基因对HEK293细胞凋亡及细胞周期的影响。结果成功构建PDC315-FAM172A真核表达载体,经酶切、测序证实插入序列正确。与PDC315质粒转染相比,XTT显示PDC315-FAM172A质粒转染使细胞增殖增加约52%（A值为0.21±0.07比0.32±0.06,P＜0.01）;生长曲线显示PDC315-FAM172A质粒转染使HEK293细胞生长速度增快;PI单染色法显示PDC3 15-FAM172A质粒转染使细胞凋亡减少约38.5%（分别23.79%±1.36%比14.64%±0.95%,P＜0.01）,同时G0～G1期细胞明显减少（分别66.79%±1.73%比58.16%±0.75%,P＜0.01）而S期细胞明显增加（分别22.62%±1.16%比33.56%±0.94%,P＜0.01）;膜联蛋白V/PI双染色法显示PDC315-FAM172A质粒转染使早期凋亡细胞减少约28%（13.63%±0.56%比9.79%±0.39%,P＜0.01）,晚期凋亡细胞减少约29%（7.70%±0.29%比5.43%±0.29%,P＜0.01）。结论 FAM172A蛋白促进HEK293细胞增殖、抑制凋亡、促使细胞进入S期,提示FAM172A蛋白的生理功能之一是参与细胞生长的调控,这为深入研究FAM172A蛋白的生理功能及在糖尿病大血管并发症中的作用提供了线索。