表达PTEN同时沉默Livin基因载体的构建和鉴定

摘要

目的构建表达PTEN基因、同时又沉默Livin基因的复合载体,探讨调控PTEN和Livin基因对胃癌细胞的影响。方法根据GenBank中人DNA的PTEN基因（NM000314）和Livin（NM139317）基因的全长序列设计,分别构建出表达PTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN和沉默Livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-Livin。切下pRNAT-U6.1-siLivin中的Livin siRNA单元,将其重组入pCL-neo-PTEN;鉴定得到表达PTEN同时沉默Livin基因的重组载体pCL-neo-PTEN-siLivin。脂质体包裹3个重组载体分别转染胃癌BGC823细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测胃癌BGC823细胞PTEN和Livin基因mRNA和蛋白表达情况。结果经过限制性酶切和测序鉴定得到重组子pCL-neo-PTEN、pRNAT-U6.1-Livin和pCL-neo-PTEN-siLivin。转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞中PTEN基因mRNA（0.897±0.112）和蛋白高水平表达,与对照组细胞（0.277±0.036）比较差异有统计学意义（P＜0.05）,与转染pCL-neo-PTEN的比较差异无统计学意义（P＞0.05）;转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞中Livin基因mRNA（0.071±0.009）和蛋白表达抑制,与对照组细胞（0.338±0.044）差异有统计学意义（P＜0.05）,与转染pRNAT-U6.1-siLivin的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论成功构建出表达PTEN基因同时又沉默Livin基因的重组载体。