去甲斑蝥素诱导肝癌细胞凋亡的实验观察

摘要

目的观察去甲斑蝥素（NCTD）诱导肝癌细胞凋亡的分子学机制,为合理应用NCTD治疗肝细胞肝癌提供理论基础。方法对肝癌细胞株SMMC-7721,BEL-7402进行体外培养,应用不同浓度的NCTD（3、10、30μg/ml）处理肝癌细胞,采用MTT方法检测细胞生存率,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western印迹检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶（caspase）和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）蛋白,以及Bcl-2家族蛋白的表达。结果 MTT检测显示NCTD处理24、48和72 h后SMMC-7721细胞IC50分别为12、6和1.6μg/ml,BEL-7402细胞IC50分别为10、4和2μg/ml;锥虫蓝拒染法结果显示,浓度为3、10、30μg/ml的NCTD处理24 h后,SMMC-7721细胞的死细胞率分别为16.89%、46.16%、72.13%,均显著高于未处理对照组的死细胞率3.34%（P＜0.01）;BEL-7402细胞的死细胞率分别为19.59%、50.10%、90.3l%,均显著高于未处理对照组的死细胞率2.88%（P＜0.01）。流式细胞仪检测显示,NCTD 10μg/ml处理12 h,SMMC-7721细胞凋亡率达到27%,较未处理对照组（7%）升高20%,BEL-7402细胞凋亡率达到30%,较未处理对照组（8%）升高22%;Western印迹结果显示,NCTD 10μg/ml处理8、14和24 h后,在两株肝癌细胞均检测到caspase-9,-3活化,PARP蛋白裂解,以及Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1蛋白的表达下调。结论结果提示NCTD具有较强的抑制肝癌细胞生存和诱导肝癌细胞凋亡作用。NCTD的抗肝癌作用机理可能是通过诱导多个Bcl-2抑凋亡家族蛋白表达下调,激活内源性线粒体凋亡通路,诱导肝癌细胞发生凋亡。