抗原致敏树突细胞激活细胞毒性T淋巴细胞的体外抗肿瘤作用

摘要

目的利用新型诱导剂钙离子载体（CI）A23187联合重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）体外诱导人外周血单核细胞（PBMC）生成树突细胞（DC）,观察DC刺激细胞毒性T细胞（CTL）对人白血病细胞K562细胞产生的特异性杀伤作用。方法采用密度梯度离心法及黏附法分离出PBMC,分2组培养:传统方法组,加入rhGM-CSF+重组人白细胞介素4+重组人肿瘤坏死因子-α;新型诱导剂组,加入rhGM-CSF+CI A23187。培养开始前,予K562细胞冻融抗原致敏,培养96 h后收集负载抗原的DC。光镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测DC细胞的表面标志;四甲基偶氮唑盐比色法检测各组DC刺激同种异体外周血T细胞增殖的能力、DC对K562细胞的抑制作用和DC激活的CTL细胞对K562细胞的杀伤作用。结果与传统方法相比,A23187联合rhGM-CSF诱导培养的DC具有更加典型的树突形态;DC表面分子CD83、CD1a、CD86、CD40表达（45.2%±1.8%、31.5%±3.9%、40.1%±7.8%、36.4%±6.3%）较传统方法组（16.9%±1.3%、20.4%±3.4%、26.5%±2.2%、22.3%±3.0%）明显高（均P＜0.05）,且CD14表达（5.7%±0.8%比19.0%±1.6%）明显低（P＜0.05）;负载K562细胞冻融抗原后的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖作用;对K562细胞有明显抑制作用,效靶比为1:1及10:1时,抑瘤率分别为（25.3±3.8）%比（15.6±2.4）%、（35.6±5.2）%比（22.9±3.2）%（均P＜0.05）;刺激的CTL对K562细胞有明显的杀伤作用,效靶比为10:1及40:1时,杀瘤率分别为（44.3±6.2）%比（29.9±2.8）%、（61.0±5.2）%比（43.1±4.8）%（均P＜0.05）。结论新型诱导剂CI A23187联合rhGM-CSF能更有效地诱导PBMC生成强效成熟DC,K562细胞冻融抗原冲击该DC激活CTL能够获得较强的杀伤K562细胞的能力。