重组腺相关病毒转导人树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫应答

摘要

目的探讨携带甲胎蛋白基因的重组腺相关病毒（rAAV-AFP）转导人树突状细胞（DC）体外诱导抗肝癌免疫应答。方法分离健康志愿者外周血单核细胞,贴壁细胞转导rAAV-AFP后,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）和白细胞介素4（IL-4）的联合作用下,诱导分化为DC。用四唑盐（MTS）比色法检测AAV-AFP转导的DC（AAV-AFP+DC）刺激自体T细胞增殖的能力;流式细胞仪检测DC表型、AAV-AFP转导DC的效率以及AAV-AFP+DC激活的T细胞干扰素γ（IFN-γ）和IL-4的分泌;乳酸脱氢酶（LDH）释放细胞毒试验检测AAV-AFP+DC刺激的T细胞对AFP阳性肝癌细胞系的杀伤活性。结果 AAV-AFP转导的DC高表达人类主要组织相容性复合体Ⅰ类分子（HLAⅠ,97.12%）、HLAⅡ（97.32%）、CD80（38.94%）、CD83（60.84%）、CD86（98.14%）等DC的典型表面标记;AAV-AFP转导后,81.2%的DC表达AFP;AAV-AFP+DC能够有效地刺激自体T细胞增殖、活化,激活后19.84%的CD4+T细胞和18.65%的CD8+T细胞能够分泌IFN-γ而不分泌IL-4,对AFP阳性的肝癌细胞系HepG2、BEL7402杀伤率分别为56.45%和78.84%。结论 AAV-AFP+DC体外能够诱导出有效地抗AFP阳性肝癌免疫应答,为AFP表达阳性的肝癌患者的主动性免疫治疗提供了实验依据。