靶向抑制EGFR联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响及机制

摘要

目的观察靶向抑制表皮生长因子受体（EGFR）联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖及凋亡的协同作用,探讨二者间的协同作用机制。方法设计并合成针对人EGFR基因特异性siRNA,构建慢病毒pFU-GW-RNAi载体,感染人胰腺癌Panc-1细胞,获得稳定转染细胞株。Real time PCR检测Shh和Gli1的表达情况;克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Western印迹方法检测ERK和AKT磷酸化水平变化;裸鼠移植瘤模型检测移植瘤生长抑制情况。结果慢病毒介导的RNAi显著抑制Panc-1细胞EGFR的表达;靶向抑制EGFR后Panc-1细胞对环巴明的敏感性显著增加,细胞增殖能力下降,其半数抑制剂量（IC50）从（2.978±0.336）μmol/L下降到（1.698±0.057）μmol/L,P＜0.05;联合处理组细胞早期凋亡比率高达38.75%,显著高于单独抑制EGFR组（17.65%）及对照组（3.02%）,P＜0.05;裸鼠移植瘤实验结果显示联合处理组移植瘤体积（394.8±87.5）mm~3显著低于抑制EGFR组（594.7±86.1）mm~3和单独应用环巴明处理组（771.3±82.9）mm~3;克隆形成实验结果显示联合处理可以进一步抑制细胞增殖;抑制EGFR后胰腺癌细胞ERK和AKT磷酸化水平较对照组显著降低,联合应用环巴明处理后二者磷酸化水平均进一步下降。结论靶向抑制EGFR联合环巴明处理后胰腺癌细胞体内外增殖能力均进一步被抑制,细胞凋亡率进一步增加;其协同机制可能部分与调控ERK和AKT磷酸化水平相关。